无毒的EB替代物gelred？怎么实验确定无毒？gelred使用后怎么处理？

身为生物专业实验员的硕士研究生，博士研究生用的最多的是电泳时还是使用EB。近来很多生物公司推销有无毒的EB替代物某某red，为什么说卖的替代物就无毒呢？某公司技术支持除了强调该产品真对人体无毒外，没说出来什么别的东西。有材料称，如果产品是可以完全代替EB而又无毒的话，你就必须具备以下几点指标：

1.艾姆斯氏试验以证明染料无诱变性

2.手套及皮肤的无渗透性实验

3.对DNA及RNA的迁移率实验

4.敏感性实验证明其染色效率

5.是否可降解及其对环境的影响

6.活细胞的穿透性

现在市场上可以说号称无毒的EB替代物有些泛滥，主流有以下几种：

一。GelRed 或GelGreen

GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。

特性:

1.高灵敏度

GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料

2.稳定性极好

可以使用微波炉加热，可以在室温下保存,不易挥发。

3.更安全

艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭 （ EB ）（请注意不是没有，所以还是要戴手套。）

4.广泛的适应性

适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色

5.染色过程简单

与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗

6.对 DNA 和 RNA 的迁移影响极小

对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I

与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容

使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时， GelRed 可以完美的替代 EB ；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时， GelGreen 足以替代任意一种 SYBR 染料

以上是公司产品的介绍，以GelRed为例这种染料可用三种方法染色。1.前染法，2.后染法3.加入电泳液中。

前染法图

后染法图

这三种方法要比EB麻烦一些，但该染料的确不适合直接加到胶里面，否则图片不太好看，除此之外，过于灵敏也不是什么好事,以至于很多PCR产物在凝胶成像仪下根本分不出来浓度（都很亮）。再者，该染料会使小片段DNA迁移慢一些（与EB相比).

二。Goldview

该染料从质谱对比试验结果来看，该产品似乎就是AO（丫啶橙 ，一种剧毒产品）且荧光效果远不如EB.

三.SYBR Green

SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。

SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。可适用于多种电泳分析。

首先它是属于花箐素类核酸染料，经常有经销商只提花箐素类核酸染料，不去提SYBR Green，必须指出的是花箐类染料不是无毒的，而只是低毒的，如果是想用这种染料，就必须买电泳级别的，电泳级别的是经过修饰的，修饰有三种：1.加入卤素或氰基。2.插入环羟基。3.加入稳定剂。否则就像我们采用SYBR Green进行荧光定量PCR，溶解曲线很好，但上电泳后看到的是弥散的现象，因为这种SYBR Green并没有修饰（降低成本）在电泳过程中反复与DNA结合脱离所造成的。

由于溴化乙锭和花箐素类核酸染料具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。

(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理：

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5mg/ml；

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4，混匀，再加入等量的25mol/L HCl，混匀，置室温数小时；

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5mg/ml的溶液可如下处理：

① 按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时；

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

不管是什么品牌的染料，请尽量索取安全检验报告，如果没有的话凭什么说染料无毒呢？总要有安全实验结果证明才行吧，知识产权的保密和安全报告的公布是不冲突的。请大家记住，EB只是中毒毒性！EB早期是用来治疗人体寄生虫的(参考分子克隆)。箐素类核酸染料不是无毒，只是低毒。如果不确定的话，规范自己的操作的情况下EB还是没问题的。凡是实验都要戴手套操作，这样才能加强安全，有了安全意识比什么都重要。