英文名称：Pfu DNA Polymerase
其他名称：Pfu DNA聚合酶

级别：BR

纯度：≥99.0%
浓度：5u/ul
活性定义：在74℃、30分钟内，使10nmol的dNTPS渗入酸不溶性沉淀所需的酶量
产品组成：Pfu DNA Polymerase；10×PCR Buffer
10×PCR Buffer：200mM Tris-HCL(PH8.8), 100mM KC1, 160mM (NH4)2SO4，20mM MgSO4, 1% Triton X-100, 1mg/ml BSA
储存缓冲液：100mM Tris-HCL(PH8.3), 0.1mM EDTA, 0.1% Tween 20, 0.1% NP-40, 50%甘油
性状：液体。Pfu DNA Polymerase是从高温嗜热菌Pyrococcus furiosis中分离出来的高保真高温DNA聚合酶。Pfu DNA Polymerase具有5′-3′外切酶的活性，能纠正PCR过程中产生的错误。是目前已经发现的所有DNA高温聚合酶中在PCR过程中的出错率最低的一种，出错率比普通的Taq DNA Polymerase低10倍左右。Pfu DNA Polymerase的延伸速度为每分钟800个碱基左右，最适延伸温度为65-75℃，PCR产物为平末端，3′端不带有单个的dA
用途：生化研究。经检验无外源核酸酶的活性，以lambda DNA为摸板，可以很好的扩增2kb的DNA片段。可用于常规PCR扩增、基因的高保真扩增和表达、基因的定点突变
保存：-20℃，保质期1年

规格	包装		货期	提交
BR，5u/ul，99%	500u	200	现货

Pfu DNA 聚合酶使用说明书

产品及特点:

Pfu DNA Polymerase是Pyrococcus furiosis （激烈火球菌）DNA Polymerase基因在大肠杆菌中表达并经多次过柱纯化分离而得。可用于高保真PCR、长链PCR的扩增，还可以用于DNA片段的粘转平反应。它具有3’-5’聚合酶活性，跟常用的Taq DNA聚合酶一样，能够用于PCR反应。与Taq DNA Polymerase不同的是，它还具有3’-5’外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。

其出错率最低的是具有校正功能的耐高温DNA Polymerase中最低的。Pfu DNA聚合酶比普通Taq DNA 聚合酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍维持90％以上活性。

货号	成份	100 U包装
P1818a	Pfu DNA聚合酶 (5 U/μL)	20 uL
P1818b	10×Pfu Buffer(+ MgSO4)	200 uL
P1818-100u	使用说明书	1份

规格及成分:

运输及保存:低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法:以λDNA为模板，以10×Pfu Buffer (+ MgSO4)作为缓冲液进行体积为50 uL的PCR扩增反应为例:1.按下列组份配制PCR反应液。

成份	终浓度	用量
Pfu DNA聚合酶(5U/ uL)	1.25U	0.25-0.5 uL
10×Pfu Buffer (+ MgSO4)	1X	5 uL
dNTP Mixture（各2 mM）	各0.2 mM	5 uL
模板DNA	50 pg-1 ug	详见右表
引物1（10 uM）	0.1-1 uM	最多到1 uL
引物2（10 uM）	0.1-1 uM	最多到1 uL
灭菌蒸馏水		加到50 uL

推荐50 uL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量
哺乳动物基因组DNA	0.5-1 ug
酵母基因组DNA	5-500 ng
细菌基因组DNA	0.5-50 ng
质粒DNA	5-500 pg
PCR回收片段	1-100 pg

2.PCR反应条件:以λDNA为模板，扩增1 kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

95℃ 3 min

95℃ 30 sec.

55℃ 30 sec. 30-35cycles

72℃2 min.

72℃ 5 min

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。

注意事项:

如果需要摸索MgSO4的最佳浓度，则按下表加入MgSO4（以50 uL的PCR扩增反应体系为例）。

期望的MgSO4终浓度	1mM	2mM	3mM	4mM
25mM MgSO4使用量	1 uL	4 uL	6 uL	8 uL

相关资料：

一：10×Pfu Buffer (+ MgSO4)成分：

成份	浓度
Tris-HCl (pH8.8 at 25℃)	200 mM
（NH4)2SO4	100 mM
KCl	100 mM
Triton X-100	1%
BSA	1mg/mL
MgSO4	20 mM

二：10×Pfu Buffer (- MgSO4)成分：除没有20 mM MgSO4外。

三：Pfu Storage Buffer成分：

成份	浓度
Tris-HCl (pH8.2 at 25℃)	20 mM
KCl	100 mM
DTT	1 mM
EDTA	0.1 mM
Tween 20	0.1%
NP40	0.1%
甘油	50%

*仅供科研使用，不能应用于人体。*

生物商城